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細胞增殖
細胞增殖-毒性檢測試劑盒(CCK-8)
產品貨號:CX001L
產品規格:10000次
產品價格:4998

細胞增殖-毒性檢測試劑盒
Cell Counting Kit-8(CCK-8)
本產品常溫運輸;2~8避光保存,保質期12個月;在-20℃條件可以貯存更久。

貨號規格
goodCX001SLM 1 mL(100次)
goodCX001MLS 5 mL(500次)
goodCX001LMS 5 mL×5(2,500次)
goodCX001LMS 5 mL×20(10,000次)

產品簡介
good本試劑盒可以對細胞增殖和細胞毒性進行快速、高靈敏度的檢測,它的核心成分為一種水溶性四唑鹽,在電子耦合試劑存在的情況下,這種四唑鹽能夠被線粒體內的脫氫酶還原生成橙黃色的水溶性甲臜染料。顏色越深,說明細胞增殖得越多越快,反之,則說明細胞毒性越大。對于相同的細胞,甲臜染料顏色的深淺與活細胞數目呈線性相關。

操作步驟
good?  細胞活性檢測
good?  1. 
在96孔板中接種細胞懸液(100 μL/)。將培養板放在培養箱預培養24 h(在37,5% CO2的條件下);
good?  1. 注意:具體每孔所的細胞數目,需根據細胞大小增殖速度等因素來決定。
good?  2. 
每孔加入10 μL的CCK-8溶液(避免在孔中生成氣泡,以免影響OD值的讀數);
good?  3. 將培養板置于培養箱內孵育1~4 h;
good?  4. 用酶標儀測定在450 nm處的吸光度;
good?  5. 如果暫時不測定OD值,可向每孔中加入10 μL 0.1 M HCl溶液或者1%(W/V)SDS溶液,并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在24 h內吸光度不會發生變化。

good?  細胞增殖-毒性檢測
good?  1. 
在96孔板中接種細胞懸液(100 μL/)。將培養板放在培養箱預培養24 h(在37,5% CO2的條件下);
good?  1. 注意:具體每孔所的細胞數目,需根據細胞大小增殖速度等因素來決定。
good?  2. 
向培養板加入10 μL不同濃度的待測物質;
good?  3. 將培養板置于培養箱內孵育適當的時(例如:6,12,24或48 h);
good?  4. 每孔加入10 μL的CCK-8溶液(避免加入時在孔中產生氣泡,以免影響OD值的讀數);
good?  5. 將培養板置于培養箱內孵育1~4 h;
good?  6. 用酶標儀測定在450 nm處的吸光度;
good?  7. 如果暫時不測定OD值,可向每孔中加入10 μL 0.1 M HCl溶液或者1%(W/V)SDS溶液,并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在24 h內吸光度不會發生變化。
good?  1. 注意:如果待測物質有氧化性或還原性,可在CCK-8之前更換新鮮培養基,去藥物的影響。當然如果藥物影響比較小,可以不更換培養基,直接扣除培養基中加入藥物后的空白吸收即可。

good?  標準曲線制作
good?  1. 
使用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量,然后接種細胞;
good?  2. 按比例(例如:1/2比例)依次用培養基等比稀釋成一個細胞濃度梯度,一般要做3~5個細胞濃度梯度,每組3~6個復孔;
good?  3. 接種后培養2~4 h使細胞貼壁,然后加CCK-8試劑培養一定時間后測定OD值,制作出一條以細胞數量為橫坐標(X軸),OD值為縱坐標(Y)的標準曲線。根據此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數量(使用此標準曲線的前提條件是實驗的條件要一致,便于確定細胞的接種數量以及加入CCK-8后的培養時間)。

注意事項
good1. 
初次實驗時,建議先做幾個孔摸索接種細胞的數量和加入CCK-8試劑后的培養時間;
good2. 若細胞培養時間較長,培養基顏色發生變化或pH發生變化,建議更換新鮮的培養基后再加入CCK-8試劑。含有酚紅的培養基不影響本試劑盒做細胞活性的測定;
good3. 如果樣品為高渾濁度的細胞懸液,建議設定600 nm(或600 nm以上)作為參比波長,扣除參比波長的OD值即可;
good4. CCK-8試劑對細胞的毒性低,CCK-8法檢測后細胞仍然可正常生長,但為避免CCK-8試劑可能對后續檢測造成影響,不推薦CCK-8試劑孵育過的細胞用于其它實驗;
good5. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作;
good6. 本產品僅限科研使用。


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YU, Qiang, et al. PPARγ/NF‐κB and TGF‐β1/Smad pathway are involved in the anti‐fibrotic effects of levo‐tetrahydropalmatine on liver fibrosis. Journal of cellular and molecular medicine, 2021, 25.3: 1645-1660.(IF 5.310)

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