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蛋白快速抽提
柱式動物組織/細胞總蛋白抽提試劑盒
產品貨號:PC201
產品規格:50次
產品價格:498

柱式動物組織/細胞總蛋白抽提試劑盒
Column Tissue&Cell Protein Extraction Kit
本產品常溫運輸( 蛋白酶抑制混合 需冰袋運輸);變性裂解液  天然裂解液 儲存于4,蛋白酶抑制混合 儲存于-20,其它組分儲存于常溫。保質期12個月。

貨號規格

goodPC201plus   50次
goodPC201plus   50次(含蛋白酶抑制劑混合液) 

產品內容

組分名稱 PC201 PC201plus
變性裂解液 25 mL 25 mL
天然裂解液 25 mL 25 mL
蛋白酶抑制劑混合液 500 μL
純化柱 50個 50個
收集管 50個 50個
塑料研磨棒 4根 4根


產品特點
gd操作簡單快速——最快1 min即可得到變性總蛋白;
gd無蛋白丟失——可打開DNA雙鏈,高效獲取與DNA結合的蛋白;
gd小樣本量、高得率——最小可處20 μL樣本與裂解液混合物,提取的蛋白溶液濃度可2~8 mg/mL;
gd適用多種實驗——含有兩種裂解液,既可用于提取變性蛋白質,也可提取天然蛋白質。

產品簡介

good本試劑盒創新性地采用過柱純化的方法,能夠快速、溫和、高效地裂解動物組織或細胞,有效提取蛋白。試劑盒同時提供變性和天然兩種裂解液,用戶可根據下游實驗需求進行選擇。整個提取過程僅需1~8 min,由于采用過柱純化技術,最小可處20 μL樣本與裂解液混合物,最大可500 μL,提取的蛋白溶液濃度可2~8 mg/mL,并可有效避免蛋白丟失。所提蛋白可采BCA法進行蛋白定量分析(貨號ZJ101或ZJ102),不宜使用 Omni-Rapid?快速蛋白定量試劑盒(貨號ZJ103)。 

使用說明

goodA. 提取變性總蛋白

good1. 將純化柱及收集管放在冰上預冷;

good2. 樣品處理(取適當量的 變性裂解液 ,在使用前數分鐘蛋白酶抑制劑混合液 按1:100加入其中;PC201plus已包含 蛋白酶抑制劑混合液 ,PC201則需額外購買<貨號GRF101>。) g

oodgood2a. 貼壁細胞將預冷1×PBS(貨號PS110)直接加入培養板、培養皿或培養瓶中清洗貼壁細胞,吸去上清。按照附表(文末)中將相應體積的 變性裂解液 均勻加入整個器皿表面,用移液器吹打幾次;
goodgood2b. 懸浮細胞低速離心收集細胞,1.5 mL離心管中加入預冷1×PBS,渦旋震蕩,3,000 rpm2~3 min清洗細胞。吸去多余上清,留下與細胞相同體積PBS,渦旋震蕩重懸細胞。加入附表中相應體積的 變性裂解液 ,渦旋震蕩裂解細胞;
goodgood注意:部分未完全裂解的細胞不會影響后續蛋白提取效果。
goodgood2c. 組織樣本:將15~20 mg組織放置于純化柱上,用塑料研磨棒扭轉研50~60次,加200 μL 變性裂解液 ,繼續研30~60次。如果組織樣本起始量較大或者較小,需按比例調整相應裂解液的用量;
goodgood注意:塑料研磨棒可以重復使用,用蒸餾水徹底沖洗干凈,用紙巾擦干。g

ood3. 離心

goodgood3a. 貼壁細胞或懸浮細胞:將裂解的細胞轉移到預冷的純化柱套管中,14,000~16,000 rpm30 s取出;
goodgood3b. 組織樣本:蓋上純化柱蓋子室溫孵1~2 min,14,000~16,000 rpm1~2 min取出;

goo4. 立刻將收集管放置于冰上,棄去純化柱,變性總蛋白提取完成。


 goodB. 提取天然總蛋白

good1. 將天然細胞裂解液,純化柱及收集管放在冰上預冷;

good2. 樣品處理(取適當量的 天然裂解液 ,在使用前數分鐘蛋白酶抑制劑混合液 按1:100加入其中;PC201plus已包含 蛋白酶抑制劑混合液 ,PC201則需額外購買<貨號GRF101>。) 

goodgood2a. 貼壁細胞將預冷1×PBS(貨號PS110)直接加入培養板,培養皿或培養瓶中清洗貼壁細胞,吸去上清。按照附表中將相應體積 天然裂解液 均勻加入整個器皿表面,放置于冰上孵3~5 min,用移液器吹打幾次;

goodgood2b. 懸浮細胞低速離心收集細胞,1.5 mL離心管中加入預冷1×PBS,渦旋震蕩,3,000 rpm2~3 min清洗細胞。吸去多余上清,留下與細胞相同體積PBS,渦旋震蕩重懸細胞。附表中相應體積的 天然裂解液 ,渦旋震蕩裂解細15 s。將離心管放置于冰3~5 min,然后渦旋震10 s;
goodgood注意:①部分未完全裂解的細胞不會影響后續蛋白提取效果;
goodgood注意:②加入裂解液后,如果細胞裂解物太過粘稠,無法用200~1,000 μL吸頭吹打,可將細胞裂解物直接倒入倒入純化柱中,進行后續操作。
goodgood2c. 組織樣本:將15~20 mg組織放置于純化柱上,用塑料研磨棒扭轉研磨50~60次,加入200 μL 天然裂解液 ,繼續研磨30~60次。如果起始量較大或者較小,需調整相應裂解液的用量比例;
goodgood注意:塑料研磨棒可以重復使用,用蒸餾水徹底沖洗干凈,用紙巾擦干。

good3. 離心 

goodgood3a. 貼壁細胞或懸浮細胞:將裂解的細胞轉移到預冷的純化柱套管中,14,000~16,000 rpm30 s取出;
goodgood3b. 組織樣本:開蓋冰上孵育5 min,蓋上純化柱蓋子,4℃,14,000~16,000 rpm離心1~2 min取出;

good4. 立刻將收集管放置于冰上,棄去純化柱,天然總蛋白提取完成。

附表 細胞數量與所需裂解液體積之間的關系

細胞數量(×106) 裂解液(μL)
0.3 20
0.5 50
1 100
2 200
3 500


注意事項
good1. 若使用本試劑盒裂解液裂解樣本所得產物比較粘稠,此為正?,F象;
good2. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作;
good3. 本產品僅限科研使用。


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